какие клетки окрашиваются что такое витальный краситель

ВИТА́ЛЬНОЕ ОКРА́ШИВАНИЕ

Том 5. Москва, 2006, стр. 390
Скопировать библиографическую ссылку:

ВИТА́ЛЬНОЕ ОКРА́ШИВАНИЕ (при­жиз­нен­ное ок­ра­ши­ва­ние), ме­тод ок­ра­ши­ва­ния жи­вых кле­ток спец. кра­си­те­ля­ми, при­ме­няе­мы­ми в не­ток­сич. кон­цен­тра­ци­ях. Та­ки­ми кра­си­те­ля­ми мо­гут быть ос­но́в­ные (напр., ме­ти­ле­но­вый си­ний) и ки­слот­ные (напр., фе­но­ло­вый крас­ный). Про­ни­кая в клет­ки жи­вот­ных, од­ни кра­си­те­ли диф­фуз­но ок­ра­ши­ва­ют ци­то­плаз­му, дру­гие кра­си­те­ли от­кла­ды­ва­ют­ся в ви­де гра­нул в об­лас­ти ком­плек­са Голь­джи, ос­тав­ляя яд­ро и ци­то­плаз­му не­ок­ра­шен­ны­ми. При по­вре­ж­де­нии кле­ток ок­ра­ши­ва­ние диф­фуз­ны­ми кра­си­те­ля­ми уси­ли­ва­ет­ся, гра­ну­ляр­ные же те­ря­ют спо­соб­ность об­ра­зо­вы­вать гра­ну­лы и ок­ра­ши­ва­ют ци­то­плаз­му и яд­ро диф­фуз­но. В жи­вых клет­ках рас­те­ний кра­си­те­ли кон­цен­три­ру­ют­ся в ва­куо­лях, в мёрт­вых – про­кра­ши­ва­ют весь про­то­пласт. Эти осо­бен­но­сти да­ют воз­мож­ность от­ли­чать мёрт­вые и по­вре­ж­дён­ные клет­ки от жи­вых. Ко­ли­че­ст­вен­ный учёт свя­зан­но­го клет­ка­ми кра­си­те­ля по­зво­ля­ет су­дить о бо­лее тон­ких сдви­гах в их функ­цио­наль­ном со­стоя­нии. Ки­слот­ные гра­ну­ляр­ные кра­си­те­ли при­ме­ня­ют­ся для вы­яв­ле­ния эле­мен­тов ре­ти­ку­ло­эн­до­те­ли­аль­ной сис­те­мы и изу­че­ния их со­стояния; ме­ти­ле­но­вый си­ний – для из­би­ра­тель­ной ок­ра­ски отд. ней­ро­нов. Рас­пре­де­ле­ние в клет­ках флуо­рес­цент­ных кра­си­те­лей ис­поль­зу­ет­ся для оцен­ки жиз­не­спо­соб­но­сти кле­ток и при про­ве­де­нии не­ко­то­рых ци­то­хи­ми­че­ских ис­сле­до­ва­ний.

Источник

Реминерализирующая терапия с использованием Tooth Mousse и MI Paste Plus (GC)

Проблема столь распространенного заболевания, как кариес зубов, занимает одно из ведущих мест в терапевтической стоматологии [8]. На сегодняшний день арсенал средств реминерализирующей терапии разнообразен как по составам, так и по способам применения. Для введения в ткани зуба активных компонентов используют: аппликации, полоскания, гели, лаки, пасты, пленки, электрофорез и фонофорез и т. д.

Химический состав и направленность профилактического воздействия данных средств определены процессами, происходящими в области кариозного поражения. Главной целью патогенетического воздействия является восстановление состава и структуры основного минерального компонента эмали. Достигается это несколькими путями: созданием условий для рекристаллизации гидроксиапатита или выращиванием его аналогов, обладающих меньшей растворимостью [5—7].

Большей динамической устойчивостью, чем гидроксиапатит, обладает фторапатит, что обусловливает его большую резистентность. Образование фторапатита из гидроксиапатита происходит при определенном соотношении кальция и фосфора в минерализирующем растворе и при низких концентрациях фтора [1, 3, 10, 12]. Подбор оптимального соотношения активных компонентов в минерализирующих растворах — задача очень сложная. Облегчить ее можно, используя натуральные минерализованные продукты. Так, в качестве реминерализирующих средств предложен всем известный гидролизатор костной ткани «Ремодент» [11], который отлично зарекомендовал себя в качестве реминерализирующего препарата.

Учитывая вышесказанное, наше внимание было сосредоточено на выборе натуральных минерализирующих продуктов. Из всего многообразия современных средств нас заинтересовали биодоступные реминерализирующие препараты Tooth Mousse и MI Paste Plus (GC Corporation, Япония).

Tooth Mouss

Tooth Mousse (GC Corporation, Япония) — «Мусс для зубов», или «Жидкая эмаль». Активный компонент «жидкой эмали» — Recaldent®, содержащий комплекс СРР-АСР (казеин фосфопептид — аморфный кальций фосфат). CPP-ACP разработан в School of Dental Science, University of Melbourne Victoria/Australia (Recaldent® используется по лицензии Recaldent® Pty. Limited).

Комплекс CPP-ACP вырабатывается из казеина молока. Казеин молока — это носитель действующих веществ, свободно связывается с эмалью, биопленкой, зубным налетом и мягкими тканями, доставляя кальций и фосфат туда, где они больше всего необходимы. Аморфный кальцийфосфатный комплекс — идеально сбалансированная комбинация, которая идентична утраченным составляющим эмали зубов и обеспечивает зубную эмаль свободными ионами кальция и фосфата.

Мусс для зубов — аппликационный препарат восстановления минерального баланса в полости рта и реминерализации. Применяется для снижения чувствительности зубных тканей после отбеливания, профессиональной чистки, кюретажа, ортодонтического лечения, профилактики кариеса на ранних стадиях и для нормализации слюноотделения.

MI Paste Plus

MI Paste Plus (GC Corporation, Япония) — это крем на водной основе, содержащий Recaldent® с добавлением фторида СРР-АСРF: казеин фосфопептид — аморфный кальций фосфат фторид. Уровень содержания фторида составляет 0,2 % (900ppm), что приблизительно соответствует его концентрации в зубных пастах для взрослых пациентов. В полости рта молекулы СРР-АСРF связываются с биопленкой, зубным налетом, кристаллами гидроксиапатита эмали зубов и оседают на мягких тканях, локализуя биодоступные кальций, фосфат и фторид.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить реминерализирующую эффективность мусса Tooth Mousse и крема MI Paste Plus.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Действие препаратов изучено путем оценки эффективности реминерализирующей терапии, проведенной пациентам стоматологического отделения клиники РостГМУ. Всего в клиническом наблюдении участвовали 16 пациентов — студентов РостГМУ, обратившихся за санацией полости рта.

Средний возраст пациентов составил 23±2,0 года. Всем обратившимся требовалась санация полости рта, 5 человек предъявляли жалобы на гиперестезию эмали, у 11 из наблюдаемых были выявлены очаги начального кариеса зубов. В объем клинических стоматологических исследований и лечений были включены: опрос, внешний осмотр, оценка гигиены полости рта и твердых тканей зубов. Оценка состояния зубов включала в себя индексы интенсивности кариеса зубов (КПУз) и КПУ полостей (КПУп). Начальный кариес определяли путем подсчета и окрашивания очагов деминерализации пятен.

Обследование полости рта начинали с выявления жалоб и сбора анамнеза. Оценку гигиены полости рта проводили при помощи индекса Ю. А. Федорова — В. В. Володкиной.

Оценку процессов реминерализации эмали зубов проводили при помощи теста эмалевой резистентности (ТЭР) и по минерализирующему потенциалу слюны (МП).

В объем клинических стоматологических исследований и лечений были включены: опрос, внешний осмотр, оценка гигиены полости рта и твердых тканей зубов. Оценка состояния зубов включала в себя индексы КПУз и КПУп ТЭР-тест (В. Р. Окушко и Л. И. Косарева) оценивает устойчивость эмали зубов к действию кислот [10, 12]. Методика: центральный резец верхней челюсти очищали от мягкого зубного налета раствором перекиси водорода, высушивали ватным тампоном и изолировали от слюны. На середину вестибулярной поверхности зуба на 5 сек. наносили протравочную кислоту диаметром 2—3 мм. Затем протравленный участок окрашивали 1%-ным водным раствором метиленового синего. Стирающими движениями краситель снимали сухим ватным тампоном, тщательно прижимая его к поверхности зуба. Краситель полностью снимается с непротравленной поверхности эмали, оставляя окрашенным участок протравки.

Для оценки интенсивности окрашивания использовали оттеночную 10-польную типографическую шкалу синего цвета с 10 до 100 % интенсивности цвета. При интенсивности окрашивания 30 % — эмаль зубов, устойчивая к кислотным факторам, при окрашивании от 30 до 60 % — эмаль зубов, среднеустойчивая к действию кислот, при интенсивности от 60 до 100 % — эмаль зубов, неустойчивая к действию кислот.

Минерализующий потенциал слюны (П. А. Леус) дает представление о насыщенности ротовой жидкости микроэлементами [4, 12]. Методика: на предметное стекло с помощью пипетки наносили 3 капли слюны и высушивали их при температуре 37 С. Препараты рассматривали под микроскопом при малом увеличении.

Устанавливали тип микрокристаллизации ротовой жидкости. Первый тип микрокристаллизации соответствовал насыщенной микроэлементами слюне и представлял собой удлиненные, призматической формы кристаллические структуры, чаще с радиальной ориентацией. Второй тип соответствовал среднему уровню насыщения слюны кальцием и другими элементами и выглядел как изометрически расположенные фрагменты кристаллов, без четкой ориентации. Третий тип соответствовал слюне, бедной микроэлементами, — разрозненные мелкие единичные неориентированные фрагменты кристаллов.

Выраженность процессов деминерализации изучали по степени активности очагов начального кариеса зубов (Л. А. Аксамит). Интенсивность очагов деминерализации — белых кариозных пятен оценивали методом витального окрашивания [2]. Зубы, подлежащие обследованию, тщательно изолировали от слюны, на кариозное пятно наносили ватный тампон, обильно смоченный 2%-ным раствором метиленового синего.

После применения Tooth Mousse и MI Paste Plus эмаль стало устойчивее к воздействию кислот, более резистентной к кариесогенным факторам Через 3 минуты тампон снимали, избыток красителя смывали водой. Для оценки интенсивности окрашивания использовали стандартную цветную шкалу, предусматривающую различные оттенки синего цвета от чуть голубоватого до темно-синего. Полученные результаты оценивали в баллах (от 1 до 10 баллов). При интенсивности окрашивания очагов до 3 баллов активность деминерализации низкая, от 3 до 6 баллов — активность средней степени, от 6 до 10 баллов — активность очагов деминерализации высокая.

В ходе клинического наблюдения всем пациентам была проведена профессиональная гигиена полости рта и коррекция личной гигиены. После санации полости рта назначены изучаемые средства реминерализации. Наблюдаемые пациенты использовали «жидкую эмаль» в дополнение к привычным зубным пастам. Мусс Tooth Mousse и крем MI Paste Plus наносили на зубы после чистки ежедневно, перед сном, в течение месяца. Оценка эффективности реминерализирующей терапии проводилась сразу после месячной терапии и в динамике через 6 месяцев. Из числа наблюдаемых пациентов 11 человек применяли мусс Tooth Mousse и 5 человек — крем MI Paste Plus.

Результаты исследования

Ниже представлены результаты применения препаратов для реминерализирующей терапии Tooth Mousse и MI Plus (GC Corporation, Япония).

Оценка состояния зубов по индексам КПУ зубов и КПУ полостей показала, что значения этих индексов достаточно высокие и всем наблюдаемым пациентам показана реминерализирующая терапия. Так, индекс КПУ зубов имел значение 9,1±0,8, а индекс КПУ полостей — 10,7 ±1,0. Начальный кариес зубов зарегистрирован у 68,8 % пациентов из числа обратившихся за санацией полости рта. Количество начального кариеса в среднем составляло 1,6±03, т. е. у каждого пациента в среднем регистрировали 1—2 очага начального кариеса, а интенсивность деминерализации выявленных очагов соответствовала 5,3 ±0,9 балла, что говорит об активном течении начального кариеса зубов.

За период применения мусса Tooth Mousse и крема MI Paste Plus изменились все показатели процессов де- и реминерализации в полости рта Анализ состояния гигиены полости рта у обследованных показал, что в результате коррекции гигиенических навыков и лечебно-профилактических мероприятий уровень гигиены улучшился и показатели гигиенических индексов (ГИ) за период наблюдения снизились. Так, если первоначально ГИ имел значение 1,8 — 0,3 балла, что соответствует удовлетворительному уровню гигиены, через месяц ГИ оценивался уже как «хороший» и имел значение 1,4 — 0,1 балла.

Оценка эффективности реминерализирующей терапии исследуемых препаратов проводилась сразу после месячного курса аппликаций. За период применения мусса Tooth Mousse и крема MI Paste Plus изменились все показатели процессов де- и реминерализации в полости рта. Эти показатели в группах пациентов, применяющих только Tooth Mousse или только MI Paste Plus, имели сравнимые изменения, поэтому оценку эффективности препаратов проводили в общей группе пациентов и не разделяли по применяемым препаратам (табл. № 1).

Таблица № 1. Показатели процессов де- и реминерализации в полости рта в ходе применения мусса Tooth Mousse и крема MI Paste Plus (М±m).

Так, показатели активности начального кариеса у всех наблюдаемых пациентов уменьшились. Интенсивность очагов деминерализации снизилась в 3,8 раза. Так, до ремтерапии активность кариозных очагов соответствовала значению 5,3 ±0,9 балла, после терапии — 1,4 ±0,4 балла, при (р < 0,05).

Значительно улучшились процессы реминерализации в полости рта. Анализ показателей, характеризующих устойчивость эмали зубов к действию кислот, демонстрирует, что после применения препаратов Tooth Mousse и MI Paste Plus состояние поверхностного слоя эмали стало устойчивее к воздействию кислот, эмаль стала более резистентной к кариесогенным факторам. Так, по тесту резистентности (ТЭР) показатели со значения 50,0 ±3,4 % снизились до 36,9±1,9 %.

Характеристики реминерализирующих свойств слюны показали, что ротовая жидкость стала более насыщенной микроэлементами (табл. № 1). Средние показатели по микрокристаллизации слюны до лечения соответствовали III типу — несформированные кристаллы (2,8 — 0,1 балла), после лечения — I типу — оформленная кристаллическая решетка (1,3— 0,2 балла).

Динамическое наблюдение за эффективностью реминерализирующей терапии показало, что отмечено достоверное сохранение показателей по данным, характеризующим процесс деминерализации эмали зубов и минерализирующий потенциал слюны (табл. № 2).

Таблица № 2. Показатели динамического наблюдения эффективности реминерализирующей терапии при применении мусса Tooth Mousse и крема MI Paste Plus (М±m).

Так, через 6 месяцев средние показатели активности очагов начального кариеса имели значение 2,5— 0,5 балла против 5,3— 0,9 балла до лечения (р < 0,05).

Показатели минерализирующего потенциала слюны через 6 месяцев соответствовали в среднем II типу микрокристаллизации (1,8—0,2 балла) по сравнению с первоначальным III типом микрокристаллизации (2,8—0,1балла), при (р < 0,05). По показателям, характеризующим процессы устойчивости эмали к кислотам, выраженных различий по сравнению с первоначальными значениями нами не выявлено. Так, кислотоустойчивость эмали (ТЭР) через 6 месяцев соответствовала 45,5—0,9 % и стала сравнима с первоначальными 50—3,4 % (р > 0,05).

Также анализ показателей в динамике продемонстрировал, что крем MI Paste Plus (содержащий фтористые соединения) имеет более устойчивые результаты по всем изучаемым показателям (табл. № 3, 4).

Таблица № 3. Показатели динамического наблюдения эффективности реминерализирующей терапии при применении крема MI Paste Plus (М±m).

Таблица № 4. Показатели динамического наблюдения эффективности реминерализирующей терапии при применении мусса Tooth Mousse (М±m).

Анализ данных процесса деминерализации показал, что через 6 месяцев в группе пациентов, применявших крем MI Plus, сохранялась устойчивая стабилизация процесса деминерализации эмали зубов (2,4—0,5 балла против 5,3—0,9 балла до лечения).

По тесту кислоторезистентности эмали (ТЭР) показатели 6-месячного наблюдения в данной группе имели сравнимые различия с данными до лечения (40,0— 2,8 % и 50,0 ±3,4 %). Показатели минеральной насыщенности ротовой жидкости в группе применявших крем MI Plus через 6 месяцев продолжали соответствовать высокому минерализирующему потенциалу слюны (1,2—0,2 балла при 2,8—1,2 балла до лечения).

Таким образом, реминерализирующие средства Tooth Mousse и MI Paste Plus:

• оказывают регулирующее влияние на процессы де- и реминерализации в полости рта;
• стабилизируют процессы деминерализации (приостанавливается активность начального кариеса);
• нормализируют насыщенность ротовой жидкости микроэлементами;
• повышают устойчивость поверхностного слоя эмали зубов к кариесогенным факторам.

Наиболее эффективным в нашем наблюдении оказалось средство, содержащее в своем составе фтористые соединения: крем MI Paste Plus.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Реминерализирующие препараты Tooth Mousse и MI Paste Plus (GC Corporation, Япония) являются эффективными средствами для регуляции процессов де- и реминерализации твердых тканей зубов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Аврамов О. Г. Процессы реминерализации и проницаемости эмали зубов при гигиене полости рта / О. Г. Авраамов // Труды пятого съезда стоматологической ассоциации России. — М., 1999. — С. 39.
2. Аксамит Л. А. Диагностика начальной стадии деминерализации эмали методом прокрашивания. — М. 1973. — С. 4—5.
3. Боровский Е. В. Биология полости рта / В. Е. Боровский, В. К. Леонтьев. — М.: Медицина, 2001. — 304 с.
4. Денисов А. Б. Диагностическая информативность слюны. Перспективы исследований / А. Б. Денисов // Дентал-Ревю. Образование, наука и практика в стоматологии: Тезисы докладов Всероссийского стоматологического форума. — М., 2004. — С. 253—256.
5. Кнаппвост А. Влияние ионов фтора на физиологический и патологический обмен кальция: кариес, остеопороз, атеросклероз (Гамбург) / А. Кнаппвост // Maestro. — 2000, № 1. — С. 57—60.
6. Колесник А. Г. Химические средства профилактики кариеса зубов / А. Г. Колесник, Т. Л. Пилат // Стоматология. — 1989, № 1. — С. 86—89.
7. Колпаков В. В. Физиологические основы профилактики стоматологических заболеваний / В. В. Колпаков, А. В. Брагин, А. Л. Иванова, А. В. Старикова // Материалы IX и XI Всероссийских научно-практических конференций и Труды VIII Съезда Стоматологической ассоциации России. — М., 2003. — С. 313—315.

Полный список литературы находится в редакции.

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА

(лат. vitalis жизненный, живой) — прижизненная окраска животных или растительных клеток и тканей. С этой целью пользуются почти безвредными или малотоксичными красителями. Впервые витальное окрашивание произвел австрийский ученый Унгер (F. Unger, 1848), который ввел в белые лепестки гиацинта сок красных плодов Phytolacca. В гистофизиологии животных В. о. с помощью аммиачного кармина и индиго-сернокислого натрия впервые была применена русским ученым Н. А. Хржонщевским (1864, 1866) при исследовании функции почек и печени.

В. о. является одним из важных экспериментальных методов цито- и гистофизиологии. Иногда В. о. используется в клинике в качестве функциональной пробы при изучении физиологической полноценности почек (см. Хромоцистоскопия).

С помощью В. о. возможно: 1) изучение закономерностей поступления, накопления и выделения веществ, участвующих в метаболизме организма; 2) визуальное исследование некоторых физиол, процессов (секреции, экскреции); 3) маркировка определенных участков организма (органов, эмбриональных зачатков животных и растений, клеток или их органелл); 4) изучение физиол, состояния клетки в норме и при различных раздражающих и повреждающих воздействиях; 5) обнаружение в клетке определенных хим. веществ (нуклеиновых кислот, белков). Наиболее удобный объект для проведения В. о.— культуры клеток и тканей, однако В. о. успешно применяется и для кусочков органов и даже небольших животных и растений, целиком погружаемых в краситель. В. о. проводится также путем инъекции красителя в животную или растительную ткань. Распределение красителя в клетках и тканях обычно наблюдают под светооптическим микроскопом, а в тех случаях, когда для В. о. используют флюоресцирующие красители (флюорохромы),— с помощью люминесцентного микроскопа, что значительно повышает чувствительность исследования.

Для В. о. используют гл. обр. различные анилиновые красители, применяемые при гистол, методах исследования: кислотные (анионные), основные (катионные) и нейтральные (цветн. рис. 1—3). Водные растворы кислотных красителей плохо проникают в нормальную клетку. Поскольку проницаемость резко повышается при повреждающих воздействиях, эти красители (эозин) используют для выявления клеточного повреждения. Коллоидные растворы кислых красителей (трипановый синий, литиевый кармин и др.) проникают в клетку путем фагоцитоза и используются гл. обр. для изучения ретикулоэндотелиальной системы.

Основные красители, как правило, хорошо проникают в живую клетку. Их дальнейшее распределение в клетке зависит от ее состояния. В неповрежденной или мало поврежденной клетке основные красители аккумулируются в лизосомах в виде ясно выраженных цитоплазматических гранул, поэтому флюорохром акридиновый оранжевый широко используется для прижизненного выявления лизосом. При значительном повреждении клетки прекращается накопление красителей в лизосомах и появляется диффузная окраска ядра и цитоплазмы. Изменение окраски может носить обратимый характер — так наз. паранекроз (см.).

Тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.

Тинкториальные свойства – отношение микроорганизмов к красителям.

Окраску мазка производят просты­ми или сложными методами. Простые за­ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо­вательное использование нескольких красителей и имеют диффе­ренциально-диагностическое значение. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис­пользуя красители анилинового ряда (основные или кис­лые).

Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо­фор — анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис­лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос­новные красители — генциановый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин.

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на­сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто­вые, которые и служат для окрашивания микробных кле­ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время.

Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе.

Витальное окрашивание

Витальное окрашивание

в микроскопии — окрашивание организмов или живых препаратов их тканей для повышения контраста при наблюдении под микроскопом. Прижизненная окраска позволяет наблюдать одновременно строение и функционирование организмов, клеток и тканей. [1]

Иногда витальным окрашиванием называют также введение красителя в живой организм, с дальнейшим его умерщвлением и приготовлением микропрепарата. [2]

Ряд методов витального окрашивания микроорганизмов разработан и применяется в микробиологии.

Естественная окраска колоний микроорганизмов

Существует целая группа микроорганизмов, называемая хромогенными бактериями, колонии которых как в природе, так и на искусственных средах окрашены ярко и разнообразно. Цветовая гамма представлена от нежно-лимонного до густого темно-синего и даже черного. Хромогенных бактерий множество – это и кокки, и палочки, и спириллы. Химический состав красителей тоже очень разнообразен.

Независимо от цвета колонии все хромогенные бактерии совершенно бесцветны, окраску обеспечивают капельки, кристаллики или зернышки, расположенные вне клеток и являющиеся отходами жизнедеятельности бактерий. Эти отходы могут растворяться и диффундировать в окружающую среду, что приводит к окрашиванию пространства колонии.

Неоднократно были предприняты попытки классификации хромогенных бактерий, однако успешных предложено не было.

Сегодня применяется классификация, основанная на растворимости пигмента:

• пигмент водорастворим;
• пигмент не растворяется в воде, но растворяется в спирте;
• нерастворимый ни в воде, ни в спирте пигмент.

Данная классификация несовершенна, что объясняется недостатком информации как по природе пигмента, так и по самой функции хромогенеза.

Хромогенных бактерий известно уже очень много, а сортов красителей, которые они производят, намного меньше. Это объясняется тем, что различные хромогенные бактерии производят один и тот же пигмент.

Все бактериальные пигменты делят на 3 большие группы:

• липохромы;
• продигиозин;
• бактериофлуоресцин.

Липохромы

Колонии, выделяющие липохромы, окрашены в цвета от желтого до красного. К ним относятся почти все кокки и в меньшей степени палочки.

Физико-химические свойства пигмента:

• агрегатная форма – кристаллики;
• нерастворим в воде;
• растворим в органических растворителях (спирт, бензин, эфир, сероуглерод и др.);
• омыляется горячей щелочью;
• с концентрированной серной кислотой дает синее окрашивание – липоциановая реакция Цопфа.

Продигиозин

Бактерии, выделяющие красный пигмент продигиозин, известны с давних времен как бактерии «чудесной крови».

О них упоминал Пифагор, запрещая своим ученикам есть вареные бобы, которые простояли ночь – на них могла появиться «кровь». В Средние века замечали появление «чудесной крови» на продуктах, когда сначала появляются небольшие кровавые капельки, которые очень быстро растут и прямо заливают продукты кровавым слоем.

Появление «чудесной крови» отмечалось на богатых крахмалом продуктах – хлебе, рисе, поленте, вареном картофеле, бывает на мясе или отварных яйцах, но достаточно редко. Может развиться на молоке, тогда слой сливок окрашивается в красный цвет, а само молоко быстро створаживается.

Бактерии «чудесной крови» не являются патогенными, однако некоторые продукты их жизнедеятельности – токсальбумины – обладают токсическими свойствами.

Физико-химические свойства пигмента:

• жидкость;
• малорастворим в воде;
• растворяется в органических растворителях (спирты, эфир, хлороформ, сероуглерод и другие);
• при взаимодействии со щелочами образуется оранжево-желтая краска;
• при воздействии кислот образуется карминовая и далее – фиолетовая краска;
• солнечный цвет разрушает пигмент в растворах.

Бактериофлуоресцин

Флуоресцирующий пигмент вырабатывают маленькие бактерии-палочки, подвижные за счет жгутика на одном конце, все они не образуют спор.

Физико-химические свойства пигмента:

• в чистом виде не выделен, предположительно является белковым веществом;
• водорастворим;
• не растворяется в спиртах, эфирах и бензине;
• концентрированный раствор имеет бледно-желтый цвет и флуоресцирует голубым цветом;
• обработка щелочью сдвигает флуоресценцию в зеленый цвет;
• при добавлении кислоты флуоресценция прекращается.

Кроме трех основных пигментов, были выделены пиоцианин (синий), пиоксантин (красно-бурый), синцианеин (синий) и другие.

Одни бактерии образуют пигмент всегда, другие микроорганизмы выделяют пигмент иногда. Есть бактерии, которые всегда выделяют только один пигмент, а есть бактерии, выделяющие несколько различных пигментов.

Хромобактерии изучены недостаточно хорошо, не выявлены причины, от которых зависит потеря хромобактериями способности выделять пигмент. Такие колонии называют лейкорасой. Однако при дальнейших посевах лейкораса может дать нормальное окрашивающее потомство.

Изучение способности бактерий к хромогенезу представляет большое не только научное, но и практическое значение.

Литература

Полезное

Смотреть что такое «Витальное окрашивание» в других словарях:

ВИТАЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ — окрашивание живых организмов, клеток или их частей в целях изучения … Словарь ботанических терминов

Витальное окрашивание — (от лат. vitalis жизненный, живой) гистофизиологический метод окрашивания живых растительных или животных клеток специальными красителями, при котором клетка не погибает; то же, что Прижизненное окрашивание … Большая советская энциклопедия

ОКРАШИВАНИЕ ВИТАЛЬНОЕ, ОКРАШИВАНИЕ ИНТРАВИТАЛЬНОЕ — (infravital staining) процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное … Толковый словарь по медицине

окрашивание витальное — прижизненное окрашивание клеток микроорганизмов (обычно анилиновыми красителями) для изучения морфологии, подвижности. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Окрашивание Витальное (Vital Staining), Окрашивание Интравитальное (Infravital Staining) — процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное. Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины

Прижизненное окрашивание — витальное окрашивание, метод окрашивания живых клеток специальными красителями, применяемыми в нетоксических концентрациях. Такими красителями могут быть основные, например нейтральный красный и метиленовый синий (хромофорная группа… … Большая советская энциклопедия

ПРИЖИЗНЕННОЕ ОКРАШИВАНИЕ — см. витальное окрашивание … Словарь ботанических терминов

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА — ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА,или прижизненная окраска, явление окрашивания тканей при жизни организма путем введения в него различных красящих веществ. Определение В. окраски как окраски живых тканей не совсем правильно, так как чрезвычайно трудно в ряде… … Большая медицинская энциклопедия

Хржонщевский, Никанор Адамович — (1836 1906) рус. физиолог и гистолог. В 1864 окончил Казан. ун т. Проф. Харьков. (с 1867) и Киев. (с 1869) ун тов. Работы посвящены изучению строения и физиология, функции легких, почек, печени, кровеносных и лимфатич. сосудов, функции кожи,… … Большая биографическая энциклопедия

Окраска спорообразующих бактерий

Если говорить о клеточных оболочках, то нельзя не вспомнить о спорообразующих бактериях. Споры образуются при неблагоприятных для клетки условиях и могут существовать в агрессивной среде довольно длительное время. То, что хорошо для сохранения клетки, плохо для ее изучения. Споры очень плотные и почти не пропускают жидкости, кроме того, они кислотоустойчивы. Следовательно, простое окрашивание или метод Грама оставят споры бесцветными.

Способы окраски спор могут быть разными, например, Ожешко или Циля – Нильсена, но все они сводятся к одной схеме:

• разрыхление поверхности спор химическими веществами (кислоты, аммиак, едкий натр);
• окрашивание клетки со спорой (обычно при нагревании);
• обесцвечивание цитоплазмы.

В результате получаем отлично видимую ярко окрашенную спору и бледную, почти прозрачную цитоплазму.

Витальное окрашивание Прижизненное окрашивание

Особенности разных бактерий при окрашивании

Морфологические и тинкториальные свойства бактерий различных типов отличаются. Рассмотрим наиболее часто встречающиеся их них.

Стафилококки

Наиболее часто требуется выявление тинкториальных свойств стафилококка у людей с гнойными заболеваниями кожи, слизистых, ранах, при абсцессах, сепсисе. Морфология стафилококков представлена клетками шаровидной формы, диаметр которых в среднем составляет 0,8-0,9 мкм. В чистой культуре стафилококков выявляются скопления клеток, напоминающие грозди винограда, кучки. Нередко определяют наличие стафилококков в гнойном содержимом в виде единичных, парных кокков, иногда – цепочки из нескольких элементов.

Окрашивание стафилококка для выявления тинкториальных свойств обычно проводят анилиновыми основными красителями. Учитывая свойства стафилококка, можно дать следующую характеристику данных микроорганизмов: грамположительные кокки, не образующие капсул и спор, неподвижные. В соответствии с культуральными и биохимическими свойствами стафилококка рост этих микроорганизмов наиболее активен при 37°С. Рост стафилококка на питательной среде при этом не зависит от наличия либо отсутствия кислорода.

Стрептококки

Представляют собой грамположительные клетки округлой формы, которые располагаются парами либо цепочками. При росте микроорганизмов в питательной среде жидкой консистенции образуются длинные цепочки микробов. Данные бактерии являются неподвижными, не образующими споры. Для некоторых разновидностей (например, пневмококка) характерно образование полисахаридной капсулы.

Энтеробактерии

Одним из наиболее многочисленных семейств бактерий являются энтеробактерии. Важнейшее место среди таких микробов отводится роду эшерихий. Подобными свойствами обладают представители кишечной палочки рода сальмонелла и шигелла.

Такие бактерии представляют собой грамотрицательные палочки, которые достигают размеров 1-5 мкм длиной и 0,4-0,8 мкм шириной. Спор у кишечной палочки не бывает, однако некоторые виды способны образовывать капсулу. Эти палочки являются подвижными за счет жгутиков. Роды данных микробов подразделяются на виды в зависимости от того, какие ферментативные свойства характерны для них:

• выделение сероводорода;
• образование газа при процессе ферментации глюкозы;
• расщепление лактазы.

Эшерихии

Морфологически клетки эшерихий имеют вид грамотрицательной прямой палочки, размеры которой составляют 2-6 мкм в длину и 0,4-0,6 мкм в ширину. Для эшерихий характерно наличие жгутиков, благодаря которым они подвижны. При посеве на твердые среды для эшерихий характерно прорастание колоний S- либо R-формы. При посеве на жидкие среды культура эшерихий дает осадок и помутнение.

Эшерихия коли (Escherichia coli)

С целью микробиологической диагностики эшерихий применяются испражнения (кишечный эшерихиоз), отделяемое раны, ликвор, моча, кровь. Однако для выявления и изучения палочки эшерихий наиболее информативен бактериологический метод исследования тинкториальных свойств.

Патогенез

Современная концепция развития кариеса связывает его развитие с влиянием четырех основных факторов:

• изменение состава слюны, употребление сахаров;
• колонизация бактерий;
• нарушение местного иммунитета;
• время, по истечении которого развивается деструкция эмали.

В результате частого употребления сладкого и недостаточного ухода за полостью рта микроорганизмы скапливаются в области шейки зуба и межзубном пространстве, образуя зубной налет. В него проникают остатки пищи, слюна и другие, патогенные бактерии. Так образуется биопленка, которая покрывает поверхность зуба.

Под биопленкой скапливаются органические кислоты, происходят процессы окисления и брожения, что вызывает изменения слабощелочной реакции локальной среды в кислую. Совокупность перечисленных факторов вызывает деминерализацию наименее стойких участков эмали, а именно, ее подповерхностного слоя. При этом растворяются кристаллы гидроксиапатита, между ними увеличиваются расстояния, сквозь которые проникают кариесогенные агенты и разрушают эмаль.

Однако, кариес в стадии пятна является обратимым нарушением. Параллельно деминерализации, происходит реминерализация пораженных участков и некоторые поражения могут проходить самостоятельно.

Причины

Развитие кариеса в стадии пятна связано со снижением кариесрезистентности или повышения кариесвосприимчивости. Резистентность к кариесу формируется у здоровых людей, не имеющих соматических заболеваний и вредных привычек, соблюдающих правила по уходу за полостью рта, а также питающихся сбалансированной по микро- и макроэлементам пищей и водой.
Повышение восприимчивости зубов к кариесу связано с нарушением деятельности внутренних органов, заболеваниями зубочелюстной системы и влиянием факторов внешней среды. Среди причин появления кариеса на стадии пятна выделяют:

• хронические болезни желудочно-кишечного тракта, печени и сердечно-сосудистой системы;
• плохую гигиену полости рта;
• период детства и юношества (от 6 до 20 лет);
• сахарный диабет;
• неполноценное питание с большим количеством сладкого и мучного и недостаточным употреблением белка;
• нарушения слюноотделения;
• недостаток фтора в воде;
• аномалии прикуса;
• травмы челюстей;
• частые стрессы;
• лучевую терапию;
• наследственную предрасположенность.

Какие бывают методы диагностики кариеса

Задачи современной стоматологии — максимальное сохранение зубов пациента и предотвращение развития патологического процесса на начальном этапе развития. С целью раннего выявления кариеса существуют различные методы эффективной диагностики. К основным из них относятся:

• опрос (врач выясняет, имеются ли у пациента какие-либо общие заболевания, например, эндокринные, выясняет образ жизни и т.п.);
• визуальное обследование;
• зондирование зубов;
• перкуссия и др.

Кроме основных, существуют дополнительные методы диагностики кариеса зубов. К ним относятся рентгенография, трансиллюминация, электроодонтодиагностика (ЭОД), лазерная флюоресцентная спектроскопия и др. Аппаратные диагностические методы позволяют выявить кариозные поражения на самых ранних стадиях, что служит залогом для успешного и своевременного лечения кариеса.

Как показывает сравнение основных и дополнительных методов диагностики кариеса зубов, какого-то одного идеального метода исследования для выявления разных видов кариеса не существует. Оптимальное представление о течении заболевания и происходящих внутри зубов процессов дает комплексный подход, позволяющий получить полную клиническую картину.